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熒光分光光度計測試需要的幾大步驟

2023-10-20 10:27:37

熒光分光光度計測試需要的幾大步驟:

 

  (***)樣品準備

 

  1.液體樣品根據用戶提供的技術指標,檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數。

 

  2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測定。

 

  (二)操作步驟

 

  1.開機:接通電源,打開主機開關,點燃(打開)光源后,根據說明書要求啟動計算機。

 

  2.檢測前準備:參照儀器說明書,在20天內至少進行***次激發校準和發射校準,檢測前儀器應預熱。

 

  3.工作條件的選擇:環境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩定,無磁場、電場干擾。根據樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。

 

  4.基本測定

 

  (1)熒光激發光譜測定

 

  設置儀器參數,掃描發射波長,找到maxλem,以此為發射波長,記錄發射強度作為激發波長的函數,便得到激發光譜。

 

  (2)熒光發射光譜測定

 

  設置儀器參數,掃描激發波長,找到maxλex,以此為激發波長,記錄發射強度與發射波長間的函數關系,便得到熒光發射光譜。

 

  (3)差譜測定

 

  設置熒光分光光度計參數,選擇合適的工作方式,測定背景溶液的發射光譜并儲存起來,在***定的工作方式下,掃描樣品溶液的發射波長,得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值,即差譜。

 

  (4)峰面積積分

 

  選擇適當的工作方式,對樣品溶液進行積分操作,即得到峰面積積分。

 

  (5)熒光強度

 

  選擇合適的測量參數,設置λex、λem,采用定點讀數或掃描方式,即可測得所選波長處的熒光強度。

 

  (6)定量測定

 

  配制***系列已知濃度的標準溶液,在***定的測定條件下,設置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測定標準溶液的熒光強度,繪制熒光強度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

 

  (三)分析結果的表述

 

  1.熒光激發光譜、發射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。

 

  2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。

 

  3.定量測試:在相同的測定條件下,測定***系列已知濃度的標準溶液的熒光強度,繪制出熒光強度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強度測定后,由工作曲線求出該溶液的濃度



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