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凝膠過濾柱操作注意事項

2025-11-28 09:13:07

 凝膠過濾柱是***種基于分子大小差異進行分離的層析技術核心工具,也被稱為分子篩層析柱或尺寸排阻層析柱(Size Exclusion Chromatography, SEC)。

 

  凝膠過濾柱操作注意事項:

 

  層析柱的選擇:

 

  理想的層析柱的直徑與長度之比是1:25~100。當用同樣直徑的層析柱分離兩種以上的物質時,長層析柱比短的分辨率高;當用同樣長度的層析柱分離兩種以上的物質時,層析柱直徑大的比小的分辨率高。

 

  裝柱效果:

 

  裝柱效果對凝膠過濾層析影響很大,應該嚴格按照說明要求,使用裝柱裝置裝柱。確保柱床表面平整,無溝流及氣泡,否則應重裝。

 

  洗脫條件:

 

  洗脫過程中應嚴格控制流速,切勿過快。上樣的體積要小,濃度不宜過高。加樣及整個洗脫過程中,嚴防柱面變干。

 

  緩沖液的選擇:

 

  純化過程必須嚴格控制緩沖液的pH及離子強度。避免使用對凝膠或樣品有損害的緩沖液。

 

  柱子的保養與保存:

 

  凝膠過濾柱需要注意防止微生物的生長。被微生物污染后的色譜柱將無法重現原來的分離效果與柱效,嚴重時會使凝膠色譜柱報廢。

 

  常用的保存抑菌劑有0.02%疊氮鈉、0.002%洗必泰(hibitane,雙氯苯雙胍己烷)、0.01%~0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氫氧化鈉等。

 

  值得注意的是溫度不能過低,以免凍結。為了不凍結可以提高保存時介質的離子強度。


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